摩洛哥人群MIF，FCGR2A和FCGR3A的基因多态性与易感性对肺结核影响分析外文翻译资料

摩洛哥人群MIF，FCGR2A和FCGR3A的基因多态性与易感性对肺结核影响分析

Khalid Sadki^a, *，Hoda Lamsyah^a，d ，Blanca Rueda^b ，bELmahfoud Akil^c，Abderrahim Sadak^d ,dJavier Martin^b,1,Rajae E1 Aouad^e,1

Abstract

^a摩洛哥拉巴特国立卫生研究院免疫学实验室人类基因组研究室
^b免疫学系，InstitutodeParasitologiayBiomedicinaL@ EZ-Neyra，中船重工，18100Armilla，格拉纳达，西班牙
^c摩洛哥拉巴特国家卫生研究所结核病国家免疫实验室
^d摩洛哥大学穆罕默德·V·拉巴特·阿格达尔大学生命科学系
^e摩洛哥拉巴特10000国家卫生研究所免疫学和病毒学系
收到刊物2009年10月25日;修订2010年2月9日;接受2010年2月24日

摘要：

为了研究巨噬细胞移动抑制因子（MIF）功能多态性,cD16A（fCGR3A）和CD32A（FCGR2A）基因对摩洛哥人肺结核病（PTB）易感性的影响，我们分析了123例肺结核病（PTB）病例组和154例健康对照组的基因分型。基因MIF-173（G/C）（rs755622），FCGR2A-131H/R（rs1801274）和FCGR3A-158V/F（rs396991使用TaqMan SNP Genotyping Assay分析法进行。我们发现病例组和健康对照组的MIF-173CC纯合子基因型和MIF-173*C等位基因频率的比较具有统计学意义，（分别为17.07％和5.84％，P=0.003和35.37％-26.30％，P=0.02）。而FCGR2A-131H/R和FCGR3A-158V/F多态性与结核病无统计学意义。表明MIF-173C变异体可能在活动性肺结核的发生发展中发挥着重要作用。

关键词：FCGR;MIF;多态性;易感性;肺结核; 摩洛哥人群

前言

肺结核（TB1）是由结核分枝杆菌（Mtb）引起的，是一种病死率很高的传染性疾病。随着人口数量的大量增长，结核病病例也在不断地增长，2007年中，肺结核人数达到 930万例，艾滋病病毒阳性人群中有130万人死于结核病。（http://www.who.int/tb/publications/globareDort/2009/en/index.htm1）。根据我们的首长报告流行病学和防治疾病报告（数据不是出版），在摩洛哥，每年都有500至1,000人死于结核病，在2008年，每100.000个居民登记中都有80.7个新的肺结核病例出现。受感染人群中只有5％〜10％的可能发展成活动性肺结核。人类免疫缺陷病毒疱疹病毒感染、肝硬化和营养不良等是影响结核病发展的主要因素，而遗传因素则是最重要的决定因素，如从不同的一致率显示单卵双生和双卵双生易患Mtb感染（Jepsonetal。，2001;Bellamy，2003）。

Mtb的保护性免疫应答依赖于CD4 ，CD8 T淋巴细胞和自然杀伤细胞产生的gamma;干扰素（IFN）-gamma;产生的）（Flynn等，2001）。可以很清楚的知道，先天的和适应性的防御是控制结核病发展的措施，（Kaufmann，2001）。事实上，在Mtb中，启动适应性细胞免疫反应主要的细胞类型是巨噬细胞和树突状细胞，（Van Crevel et al，2002）。几种细胞因子通过激活巨噬细胞和树突状细胞使T淋巴细胞活化（Oppmann等，2000）。在这些细胞因子中，巨噬细胞移动抑制因子（MIF）被认为是有助于的宿主防御病原体的因素之一(Juttner et at．1998；Roger et a1． 2001b；Calandra et a1．，2003)）.MIF是首个被发现的促炎性T细胞因子，由单核/巨噬细胞产生(Bloom et a1，1966；David，1 966；Calandraet a1．，1 994)。此外，这种细胞因子可以上调类似于受体4细胞的表达和清除内毒素细菌（bacteria(Roger et a1．，2001a，2001b)。

人类MIF基因位置于染色体22q11.2. MIF启动子区，功能多态性取决于位于173的位置的G改为C，可能是有效的以细胞类型依赖性方式启动子活性（Renner，等.2005）。不同的研究证明，这一点突变是影响加索人和非洲人的自身免疫性和传染性疾病的易感性高原因（Baugh等，2002;Donn等，2002;Sfinchez等，2006;Oliver等，2007;Temple等，2008）。然而，即使这种细胞因子在免疫反应中起着重要的作用，很少有研究报道关于MIF-173G/C多态性在疾病感染的易感性数据。关于肺结核，我们之前已经在哥伦比亚人群中发现了MIF-173 C等位基因与肺结核（PTB）之间的关联，这是潜在的遗传变异对TB的潜在作用的基础（Grmez et al。，2007）。另一方面，认为受体分子是在免疫发病过程的先天和适应性反应中，主要是参与两者中的激活和信号传导途径（Flynn等，2001）.CD16和CD32分子是受体。它们属于一组中等亲和力受体的免疫球蛋白G（IgG）（Fcg受体）。Fcg受体分为两种类型：激活受体（CD16A和CD32A）和抑制受体（CD16B和CD32B）（Ravetchetal。，2001）Fcg受体CD16A和CD32A传递激活信号使自然杀伤淋巴细胞和髓系细胞得到保证先天性和自适应性的免疫应答。当CD32A广泛表达于髓样细胞时，CD16A在NK淋巴细胞中表达巨噬细胞。（Qiu等，1990;Deo等，1997）编码这些受体的基因位于染色体1q2上的低亲和力“G尺”10CHS中（Peltz等，1989）; FCGR3A基因负责编码CD16A，FCGR2A基因负责编码CD32A。此外，已经在这些受体的细胞外区域中识别出两种功能多态性，CD16A（FCGR3A-158v/F）的缬氨酸/苯丙氨酸-158和CD32A（FCGR2A-131H/R）的组氨酸/精氨酸-131其调节对某些人IgG的敏感性亚类（Parren等，1992;Koene等，1997）。每一个多形态变异体与IgG亚类相互作用的差异与感染疾病在免疫应答过程中氨基酸发生基因突变的位置有关。（Warmerdam et a1．，1991：Koene et a1．，1997；Maxwell et al一1999）。FCGR2A-131R突变体已经确定与流感病毒、肺炎链球菌感染的脑膜炎奈瑟菌，嗜血杆菌有关（(Musser et a1．，1990；Fijen et a1．，1993；Domingo et a1．2002)。进一步研究表明，FCGR2A和FCGR3A基因突变体是一些血管炎疾病的发展并且可遗传的危险因素，如韦格纳肉芽肿病（Dijstelbloem et al。，1999），巨细胞动脉炎（Morgan et al.2006）和川崎病（Biezeveld et al.,2006）。

在本研究中，我们分析了MIF-173G/C，FCGR2A-131H/R和FCG3A-158V/F基因多态性对摩洛哥人群活动性结核的影响。

材料和方法

研究人群

将病史，体检和胸部X射线，在痰中和/或在培养物中诊断为阳性的123摩洛哥肺结核患者和154健康对照者的外周血样品收集在EDTA管中。所有患者均通过微生物学诊断法进行评估（显微镜和培养检查）。

在本研究中，结核病患者与健康人的性别比例差别不大（53/70vs.65/89，分别为女性/男性），平均年龄plusmn;标准差（SD）为患者33.30plusmn;13.09，范围16-73，和健康对照组32.89士l1.20，范围18-67，每个参加这项研究的研究对象（患者和对照）的HIVl/2感染都是阴性的（Axsym分析，Abbott实验室，芝加哥，IL，美国）。

所有的病例组和对照组均来自同一种族和社会经济地位，并签署知情同意书。此外，这项研究经当地伦理委员会批准（DirectiondEpiddmiologieetdeLuttecontrelesMaladiesInfectieuses.Morocco）。

基因分型

外周血中提取的基因组DNA由Qiagen测定（QIAampreg; DNA Blood MinKit，Ger-many）. MIF-173（G/C）（rs755622）的基因分型，FCGR2A-131H/R（rsl801274）和FCGR3A-158V/F（rs396991）由TaqMan SNP Genotyp-检测方法测定（NO.C_2213785_10;C_9077561_20;C_25815666_10，Applied Biosystems，Foster City，CA.USA）。如先前所述,聚合酶链式反应（PCR）在一个总共5uL的试管里进行（described(Gomez et a1．，2007）.PCR定量和等位基因识别在7500定量PCR系统上进行（Applied Biosystems，Foster CiCy，美国），分别测量每个样品的特异性等位基因荧光。

统计分析

病例组和对照组的等位基因和基因型频率比较分别由直接计数确定，这两个组都进行了哈代-韦伯格平衡一致性测试。统计分析使用x²和Fisher^，s精确检验（与Yates的修正），使用Epi3.4.3信息版本（疾病控制中心，美国佐治亚州亚特兰大，2007年10月1日7日）。分析基因型或等位基因之间的相对风险率，计算结核病的（0R）与95％置信区间。P值小于0.05被认为具有统计学意义。

结果

病例组和对照组的基因组DNA分析，志愿者的三种基因多态性，MIF-173（G/C），FCGR2A-131H/R和FCGR3A-158V/F（图1-3）。病例组和对照组的每个基因，基因型和等位基因频在哈代-韦伯格平衡进行。

对病例组的人口和临床特征进行分析。我们得到病例组中有高频率咳痰（88.24％），发热（94.96％）和咳嗽（99.16％）。结论：平均年龄和性别比例在病例组与健康对照组间没有显著差异。

MIF-173G/C启动子多态性的分布

病例组与健康对照组MIF-173G/C启动子多态性的基因型和等位基因频率分布见图1。我们可以观察病例组的MIF-173 CC纯合子基因型和MIF-173*C与健康对照相比的统计学显著增加，病例组的频率升高（17.07％vs.5.84％，P=0.003，OR=3.32,95％CI1.37-8.19和35.37％vs.26_30％.P=0.02.0R=1.53.95％CI 1.05-2.24）。

FCGR2A和FCGR3A基因多态性和肺结核的关系

“病例组与健康对照组的FCGR2A-131H/R和FCGR3A-158V/F 基因型和等位基因的分布如图2和图3所示。病例组的FCGR2A和FCGR3A基因的多态性和易感性与肺结核无统计学意义。

讨论

一些证据支持人类基因组在确定Mtb感染的临床结局中研究的主要作用，（Jepson等，2001，Casanova等，2002）。本次调查研究是第一次得到在摩洛哥人口中MIF，FCGR2A和FCGR3A基因多态性和肺结核疾病之间的遗传联系。在这项研究中，我们可以看到病例组的基因型和等位基因MIF-173*C显著相关，哥伦比亚的结核病例中也可以观察到同样的结果（P=0.02）（G6mezeta1。，2007）这里观察到的高比率“3.32（95％CI，1.37至8.19）”可以证实这个等位基因对肺结核的易感性。有几项研究报道了MIF的基因突变增强了患自身免疫和炎症性疾病的风险，例如囊性纤维化。（Barry et al，2005）类风湿性关节炎（de la Fontaine等，2006;Martinez等，2007），炎性多发性关节炎（Barton等，2003）和克罗恩病（Dambacher等，2007;Oliver等，2007）。Donn和她的同事用MatInspector软件发现突变发生在MIF基因的第173位（Ggt; C），形成了转录因子AP-4的潜在结合位点（Donn et a1.2002）这个位置可能对MIF的启动子活性及其表达水平有相当大的影响。即携带MIF-173*C等位基因的个体受试者的MIF血清水平显著性更高。（P=0.04）（Donn et al.2002）。，值得注意的是，PTB疾病患者的MIF血清水平升高（Yamada等，2002）。目前尚未完全了解MIF发挥其作用的病理生理机制。其中与炎症反应有关的主要分子是在胞质磷脂酶A2的调节下的分子间的相互作用。(Mitchell et a1．1 999) 来抑制p53依赖性细胞凋亡。（Mitchell et a1．，2002)．我们认为MIF基因启动子区的遗传变异可能改变炎症通路的功能并随之增加了结核病发病的风险。而且，以前的研究表明，暴露于ManLAM的人类巨噬细胞和源自毒性Mtb的19-kDa脂蛋白释放大量的MIF，暗示了这种细胞因子作为抗Mtb的免疫元件的潜在角色（Oddo et a1．，2005）

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