一项关于中非共和国军事部署诺如病毒引起的食源性疾病爆发的挑战性调查

Ste acute;phanie Watier-Grillot¹ M. Boni² C. Tong1 P.-A. Renoult³ A. Fournier³ L. Joie⁴ A. Me acute;rens⁵ A. Chesnay⁶ S. Perelle⁷ A. Fraisse⁷ K. Ambert-Balay^8,9 D. Chal¹⁰ S. Larre acute;che acute;⁵ R. Michel^1,11 V. Pommier de Santi1¹

收稿日期：2017年5月24日 接受日期：2017年6月29日/网上发布：2017年7月3日

摘要 2016年1月，法国部队在中非共和国境内发生大面积急性肠胃炎爆发。 从法国进行的具有挑战性的调查使得在粪便和食品样品中鉴定出诺如病毒基因组II成为可能，从而确认了诺如病毒食源性疾病爆发。 讨论受感染的食物处理者管理。

关键词 诺如病毒GII.2基因型 食源性疾病暴发 法国武装部队 中非共和国 食物处理

介绍

诺如病毒（NoV）是全世界人类病毒性肠胃炎的主要原因，包括一些食源性疾病（Kirk et al. 2015）.它们是造成旅行者急性腹泻的最常见的非细

菌代表（Ajami et al. 2010），并且是军队中最关心的问题，因为它们可能对操作能力有很大的影响（Delacour et al. 2010; Pommier de Santi et al. 2011; Sanchez et al 2017).。

2016年1月19日，中非共和国班吉突发900人的大规模肠胃炎暴发（北纬4度21分18秒，东经18度33分19秒）。大约有200例病例被报道，报告率显著，高达（22.2％）。第一假设就是食源性疾病暴发（FBDO）。 法国马赛的法国武装部队流行病学和公共卫生中心（CESPA）面临着在离现场三千公里以外进行爆发调查的挑战。

Steacute;phanie Watier-Grillot s.watier.grillot@gmail.com

1. 法国武装部队流行病学和公共卫生中心（CESPA），法国马赛
2. 法国国防部联合后勤和供应局，法国庞坦
3. 法国蒙托邦 - 阿根医疗股法国军事卫生服务处，法国蒙托邦
4. 法国军事卫生局地区司，法国土伦
5. 法国巴黎军事教学医院
6. 法国昂热法国武装部队食品实验室
7. 法国食品、环境和职业健康与安全局（ANSES），食品安全实验室，94700 Maisons-Alfort，法国
8. 国立胃肠炎病毒参考中心，法国第戎F. Mitterrand教学医院
9. AgroSup 第戎，PAM UMR A 02.102, 21000 第戎，法国
10. 法国里昂军事兽医部门
11. 法国巴黎Val-de-Gra circ;ce军事卫生服务学院

材料和方法

进行病例对照研究，该方法作为识别可疑食物和餐具的首选方法。实验组：一例被定义为在症状出现前三天（即1月16日，17日和18日）突发气体设施的军人。对照组（两例）是没有消化道症状的军人，在三天内曾在军事餐饮设施上吃过饭。包括83例和161例对照。一个面对面的，标准化的，匿名的问卷由军方医生在现场进行，收集关于食物和症状的数据。使用SAS University软件进行单因素和多因素分析（逻辑回归）。多变量分析包括p值小于0.2的变量。位于班吉的法国军事兽医进行了一次食品安全检查，以评估怀疑食品加工的情况。

从6例病例中收集粪便样品。这6例样品从收集开始的过程中一直被保存在零下20度的环境里直到被带到法国实验室。将粪便样品铺在不同的琼脂上（Biomerieux）：Hektoen肠溶琼脂，BCP琼脂，哥伦比亚CNA琼脂含5％绵羊血液（35℃孵育），耶尔森氏菌CIN琼脂（30℃），Karmali琼脂（微氧环境 ，41℃）和Schaedler琼脂与5％羊血（厌氧条件，35℃），使用标准的协议。 另外，亚硒酸盐培养液用于富集沙门氏菌：18小时后，将亚硒酸盐培养液传代培养到第二个Hektoen肠溶琼脂上。使用PET-RPLA试剂盒Oxoid进行肠毒素测试。 诺如病毒检测首先在Begin军事医院实验室进行，使用针对基因组I和II的诺如病毒快速诊断测试（RDT）[Ridaquick Norovirus，R-Biopharm]和逆转录-聚合酶链反应

（RT-PCR） （诺如病毒GI、GII基因型）和GenXpert系统（Xpert Norovirus，Cepheid）。将GenXpert诺如病毒RT-PCR阳性的粪便二次送至胃肠炎病毒国家参考中心进行基因分型。 如前所述，通过测序进行诺如病毒基因分型（Ouedraogo et al. 2016）。

根据病例对照研究的结果选择要检测的菜肴。 即使消费和疾病之间没有显示出显著的联系，也要测试其他食品。 这些包括由于其性质或加工方式而通常与健康风险相关的食品。 食品样本被送往法国实验室，在与上述粪便样品相同的物流限制条件下。此外，有法国食品安全总局颁发的特别授权的食品也被要求进行检测。 他们首先由法国武装部队食品实验室的标准微生物学方法进行细菌鉴定。 消费与症状显著相关的样本以及细菌分析结果呈阳性的样本，由法国食品、环境和职业健康与安全署的实验室通过RT-qPCR对诺如病毒进行二次检测。 使用标准方法进行病毒基因组的提取和检测。

结果

第一起案件发生在1月17日下午5点。 最后一起案件是1月20日下午5时。 1月18日下午6时至11时为病发流行高峰。 整个病发曲线为单峰流行曲线，提示了污染的共同点源（图1）。 主要症状为腹痛（85％，71/83），恶心（84％，70/83），腹泻（82％，68/83）和呕吐（78％，65/83）。 症状在24-48小时内缓解。 估计的潜伏期中位数为36 小时（图1），与诺如病毒感染一致（Kaplan et al.1982）。

几种菜肴，主要是新鲜食物，与单因素和/或多因素分析中的疾病呈现显著相关关系（表1）。

沙门氏菌属、志贺氏菌属、弯曲杆菌属、耶尔森菌属、产气荚膜梭菌、蜡状芽孢杆菌、气单胞菌属和邻单胞菌属的寄生虫的粪便分析是阴性的。 一个标本对金黄色葡萄球菌呈阳性，但分离物不产生肠毒素。 NoV RDTs阳性，GenXpert诺如病毒RT-PCR鉴定显示所有6个粪便样品中的存在诺如病毒GII.2基因型。

国家参考中心毫不含糊地确定了四个样本中匹配稀有GII.e聚合酶基因型和众所周知的GII.2衣壳基因型（GII.Pe / GII.2）的Nov GII变体。

对于两个样品，未分配诺如病毒衣壳和/或聚合酶基因型。 根据病例对照研究的结果，NoV GII也被认定为意大利面沙拉样本，这是最可能的污染源。 在食物中发现的诺如病毒没有基因分型，因为病毒滴度对于成功的基因分型来说太低。 此外，分别在米饭沙拉和意大利面沙拉中鉴定到产志贺毒素大肠杆菌（STEC）[5300 UFC / g]和肠杆菌科（27,000 UFC / g）的高水平污染（表1）。

将混入盘中的局部生蔬菜系统地消毒（15.6ppm氯化溶液）。 食品安全检查所强调的食品卫生实践的主要偏倚是当地招聘的食品加工者（FH），他们无法工作（医疗随访不足和一些工作人员的手上有伤痕）。

表1 病例对照研究和食物检测结果

食品种类^a 膳食 单变量分析 多变量分析 食品检测结果

OR^b [CI

95%]

p value ORa^c [CI

95%]

p value 细菌测试 病毒学检测

虾沙拉 1月17日

1.7 [0.9–3.2] 0.09 2.6 [1.2–6.0] 0.02 阴性d 阴性

意大利面

午餐

3.6 [1.8–7.0] 10-3 2.9 [1.3–6.4] 0.008 肠杆菌科: 27,000 UFC/g

NoV GII

胡萝卜/黄瓜沙拉

胡萝卜/卷心菜沙拉

晚餐

[0.3–1.4] 0.24 – – – E. coli: 70 UFC/g 阴性

[0.3–1.4] 0.24 – – – 阴性 NA

a只有食物消费与症状之间具有显着相关性的食物才具有细菌学和/或病毒学检测的阳性结果

b非调整比率

c调整后的比率

d阴性

e未评估

f产志贺毒素的大肠杆菌

结论 讨论

本研究概述了为确定军事行动期间急性肠胃炎爆发的原因所进行的具有挑战性的调查。 从警报发出之时起，直到调查报告完成，需要整整一个月的时间。 尽管存在这些困难，在粪便和食物样品中都确认了NoV GII，从而证实了NoV FBDO假说。

在法国的军事行动中，FBDO诊断目前要求将样品送到法国的实验室，这意味着后勤限制往往妨碍调查（Watier-Grillot et al. 2016）。 另一个选择可能包括实施现场诊断的可靠工具（Perrin et al.2015）。

非洲，特别是成年人中的诺如感染数据仍然很少，我们的研究有助于该地区这些病原体的整体知识（Pommier de Santi et al.2011; Ouedraogo et al.2016; Mans et al.2016）。

几种食物样本被大肠杆菌污染表明食物产品存在粪便污染。所使用的氯化溶液的浓度可能不足以对生蔬菜提供有效的消毒（Fraisse et al.2011）。 受感染的FH是NoV FBDO中最常见的促成因素之一（Franck et al.2015）。 由于粪便样本不是在当地招募的农民收集的，因此无法评估它们在这次爆发中扮演哪个部分。

到目前为止，几乎没有涉及NoV GIIPe / GII.2变种的暴发（Mans et al.2016）。人们在共同感染期间经常发生诺如病毒基因重组。 包括军事部署在内的国际旅行可能有助于这种机制（Bull et al.2007）。

法国武装部队经常部署到像旅行者一样的国家，他们接触到免疫学上幼稚的病原体。 在战争环境下，实施有效预防和控制肠道病毒FBDOs的全面战略仍然是一个挑战（Delacour et al.2010;疾病控制中心（CDC）2011）。

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