黑鳗藤的4种新型免疫调节甾体糖苷的研究外文翻译资料

黑鳗藤的4种新型免疫调节甾体糖苷的研究

李晓誉^a,b，孙洪祥^c，叶益萍^b，陈峰阳^b，屠决^c，潘远江^a,c

a浙江大学化学系,杭州，310027

b 浙江省医学科学院药物研究所，杭州，310013

c 浙江大学动物科学学院，杭州，310029

文章信息

背景：2005年9月15日收到
2006年3月29日以修订形式收到
2006年4月17日接受
2006年6月21日发表

摘要：从黑鳗藤的茎中分离到四种新的C-21甾体苷，黑鳗藤苷E（1），F（2），G（3）和H（4）。 其中两个具有罕见的C-6和C-7双键的苷元。 根据光谱数据和化学证据阐明了它们的结构。 对这些分离的化合物在体外对刀豆蛋白A（Con A） - 和脂多糖（LPS） - 诱导的小鼠脾细胞增殖的免疫活性进行测定。 化合物2和4以剂量依赖性方式显示免疫抑制活性，而化合物1和3具有免疫增强活性。

关键词：黑鳗藤；萝藦科；免疫调节活性

1.引言

免疫抑制剂是已经接受器官移植的患者的主要治疗方法，并且在治疗自身免疫性疾病中变得越来越重要。然而，作为一种治疗方式，长期免疫抑制的概念和现实存在许多问题，无论是在目前可用药物的非特异性毒性方面，还是由免疫系统全面抑制引起的感染和肿瘤风险增加，副作用小的免疫抑制剂对医疗体系仍然是一个挑战。

C-21甾体苷在抗肿瘤，抗癫痫和抗生育等方面受到了广泛的关注，许多这样的化合物已经从植物中分离出来，尤其是从萝藦科的植物中分离出来的[1-4]。黑鳗藤的干燥根，（萝藦科）用于治疗类风湿性关节炎和风湿性酸中毒。我们较早地报道了12种孕烷配糖体的分离和结构鉴定：从黑鳗藤的茎分离到的黑鳗藤苷A-D，以及stephanoside E^[5,6]，从黑鳗藤的根分离到的黑鳗藤新苷A-G^[7,8]。我们还报告了黑鳗藤新苷A-G的免疫调节活性^[7,8]。 在这些化合物中，黑鳗藤新苷A-C和F显示出免疫调节活性，而黑鳗藤新苷D，E和G显示出剂量依赖性的免疫抑制活性。

本文对该植物茎中三氯甲烷可溶性提取物的化学研究进一步进行，得到了四种新的具有免疫调节活性的C-21甾体苷：黑鳗藤苷E-H（1-4）（图1）。结果表明这些化合物在一定程度上对风湿性关节炎和风湿性疼痛的治疗是有效的。

图1 化合物1—4的化学结构

2.试验

2.1 常用方法

熔点是在MRK Prism Scope仪器上测定的，未经校正。 用Rudolph Research Autopol IV旋光仪在甲醇中测量旋光度。 紫外光谱在TU-1800PC光谱仪上进行。红外光谱记录在Perkin-Elmer 577光谱仪上的KBr颗粒上。¹ H NMR，¹³ C NMR，DEPT，¹H，¹H COSY，HMQC和HMBC谱在500MHz下记录¹H，在125MHz下记录¹³C，用Bruker DRX 500仪器在吡啶溶液中记录。 在Bruker Daltonics FTMS APEX III质谱仪上记录HRESI-MS谱。 在Bruker Esquire 3000plus质谱仪上记录ESI-MS谱。在预涂的Kieselgel 60 F254平板和Rp C18（Merck）上进行薄成色谱法，通过喷雾10％硫酸溶液 然后加热进行检测。 使用Agilent1100仪器（Zorbax柱9mmtimes;250mm，DAD），通过硅胶柱（200-300目，青岛），Rp C18（Merck）和半制备型高效液相色谱法进行分离和纯化。

2.2 植物材料

黑鳗藤的茎是从中国浙江省乐清市获得的，张志国教授确定了凭证样本（编号200208），并存放于本研究所天然产物化学实验室，中国杭州浙江省医学科学院医学研究所。

2.3提取和分离

将黑鳗藤的干燥茎（6.0kg）研磨并用95％乙醇回流提取3次，回流2小时。 将提取物真空蒸发，得到乙醇提取物（570g）。 乙醇提取物在回流下用三氯甲烷分配。三氯甲烷提取物的浓缩产生黄色残余物（223.5g）。 三氯甲烷提取物在回流下用己烷分配。 己烷不溶部分对应于粗制糖苷（193.5g）。 将粗品糖苷进行CC（硅胶，梯度三氯甲烷:甲醇40:1→5:1，v / v），得到8个主要级分。级分3（6.2g）经CC（Rp-18，甲醇：水 1:1→2:1，v / v;然后高效液相色谱法，甲醇：水 70:30，v / v），得到4（135mg）。级分4（9.4g）进行CC（Rp-18，甲醇：水1：1→2：1，v / v; 然后HPLC，甲醇：水 67:33，v / v），得到1（155mg），2（142mg）和3（86mg）。

2.3.1 Mucronatoside E (1)

C₄₈H₇₈O₂₁：白色无定型粉末，mp 155–158°，[alpha;]²⁰_D 34.1° (甲醇; ca. 0.1)，紫外 (甲醇) lambda;_max: 207.0 nm，红外 (溴化钾) lambda;_max: 3510 (OH)，1701 (C = O)， 1640 (C = C)，1165 (C – O)，1080 (C – O – C) cm-1。HRESI-MS: 1013.4923 ([C₄₈H₇₈O₂1 Na] ，calcd. 1013.4928)。ESI-MS (positive) m/z: 1013.4 [M Na] ,851.4 [M Na - 162] , 691.3 [M Na - 162-160] , 547.2 [M Na - 162-160-144] , 403.1 [M Na - 162 - 160-144-144] ,633.2 [M Na - 380] , 489.2 [M Na - 380-144] . For ¹H and ¹³C核磁共振数据参见表1和表2。

2.3.2 Mucronatoside F (2)

C48H80O21：白色无定形粉末，mp 165–167◦，[alpha;]²⁰_D 18.0◦ (甲醇; ca. 0.1)；UV (甲醇)lambda;_max: 207.0 nm；IR (溴化钾) lambda;_max: 3480 (OH), 1640 (C=C), 1165 (C-O), 1080 (C-O-C) cm-1。HRESI-MS: 1015.5103 ([C48H80O21 Na] , calcd. 1015.5084). ESIMS (positive) m/z: 1015.4 [M Na] , 853.4 [M Na - 162] , 693.3 [M Na - 162-160] , 549.3 [M Na - 162-160-144] , 633.2 [M Na - 382] , 489.1 [M Na - 382-144] , 345.1 [M Na - 382- 144-144] . For ¹H and ¹³C核磁共振数据参见表1和表2。

2.3.3 Mucronatoside G (3)
C62H92O24：白色无定形粉末; mp 158–161◦;[alpha;]²⁰_D 80.1◦ 甲醇; ca. 0.1); UV (甲醇)lambda;_max: 222.5, 279.0 nm; IR (溴化钾)lambda;_max: 3480 (OH), 1710 (C= C- C =O), 1640 (C- C), 1170 (C -O),1080 (C- O- C) cm-1. HRESI-MS: 1243.5894 ([C62H92O24 Na] , calcd. 1243.5871). ESI-MS (positive) m/z: 1243.4 [M Na] , 1095.4[M Na - 148] , 1143.4 [M Na - 100] , 995.4 [M Na - 148-100] , 633.3 [M Na - 610] , 489.2 [M Na - 610-144] . For 1H and 13C核磁共振数据参见表1和表2。

2.3.4. Mucronatoside H (4)

C53H78O19：白色无定形粉末; mp 153–156◦;[alpha;]20D 72.1◦ (甲醇; ca. 0.1); UV (甲醇) lambda;max: 222.0, 278.5 nm; IR（溴化钾）lambda;max：3485（OH），1735（C= 0），1711（C= C-C =O），1638（C= C），1165（C- 0），1080（(C- O- C）cm -1。 HRESI-MS：1041.4990（[C 53 H 78 O 19 Na] ，计算值1041.5030）。 ESI-MS（正）m / z：1041.4 [M Na] ，981.4 [M Na-60] ，893.4 [M Na-148] ，875.4 [M Na- 833.4 [M Na-148-60] ，715.4 [M Na-148-18-160] ，571.3 [M Na-148-18-160-144] ，471.2 [M Na-570] ，327.1 [M Na-570-144] 。 对于1H和13C核磁共振数据，参见表1和2。

2.3.5. 1，2，3和4的酸水解

用10ml 0.1N H₂SO₄处理40mg 1,2,3和4在10ml 甲醇中的每种溶液，并将每种混合物在60℃保持2小时，然后用H₂O（20ml）稀释并浓缩至30 ml。 将溶液保持60℃一小时，然后用氢氧化铍的饱和水溶液中和。然后滤出沉淀。 将滤液浓缩至干，在三氯甲烷:甲醇（100:1→50:1，v / v）的硅胶柱上进行色谱分离，分别是从1得到5（12.1mg）,从2得到6（10.3mg），从3得到7（9.4mg），从4得到8（11.4mg）。通过与真实样品的薄成色谱比较来鉴定每种水解产物中的糖组分。 用溶剂A：三氯甲烷:甲醇（9:1）; 溶剂B：丙酮： 石油醚（2：3）和溶剂C：二氯甲烷:乙醇_烷 （9:1）鉴定了麻糖，葡萄糖用溶剂三氯甲烷:甲醇:水（4:3:1）鉴定。

2.3.6. 12-O-去乙酰萝藦苷元（5）

C₂₁H₃₂O₆：无色针状物（甲醇）; ESI-MS m / z 403.1 [M Na] 。 ¹³ C NMR（C ₅ D ₅ N，125MHz）：

39.0（C-1），31.9（C-2），71.4（C-4），140.1（C-5），118.6（C-6），34.0（C-7），74.2（C-8），44.8（C-9），37.2（C -10），29.3（C-11），68.8（C-12），60.2 (C-13)，89.2 (C-14)，34.9 (C-15)，32.6 (C-16)，92.4 (C-17)，9.2 (C-18)， 18.3 (C-19)，209.4 (C-20)，27.7 (C-21). ¹H NMR (C₅D₅N, 500 MHz): ı 3.93 (1H, m, H-3)， 5.42 (1H, br s, H-6)， 3.98 (1H, dd, J = 11.5, 4.0 Hz, H-12)，2.04 (3H, s, H-18)，1.49 (3H, s, H-19)，2.68 (3H, s, H-21)。

2.3.7. 肉珊瑚苷元

C21H34O6：无色针状物（MeOH），ESI-MS m/z 405

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