反相高效液相色谱法同时测定药物剂型中的醋氯芬酸、扑热息痛和氯唑沙宗外文翻译资料

反相高效液相色谱法同时测定药物剂型中的醋氯芬酸、扑热息痛和氯唑沙宗

原文作者 K.A. Shaikh*，A.B. Devkhile

摘要：建立一种简单、快速、精确的反相液相色谱方法，用于同时测定商业药物制剂三元混合物中的扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗。该方法使用Zorbax SB C18，250x4.6mm，5m分析柱。流动相是乙腈和缓冲液(40:60v/v)，缓冲液含有50毫米正磷酸；用10%w/v氢氧化钠溶液将缓冲液的pH值调节至6。仪器设置的流速为1毫升/分钟；柱温为25℃，检测器波长为270 nm。样品浓度是以重量为基础测量的，以避免内标。该方法得到了验证，并被证明是线性的。扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗的相关系数分别为0.9981、0.9990和0.9986。扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗的回收率为100.7 - 101.4 %、100.4 - 101.0 %和100.5 - 101.3 %，六次重复的相对标准偏差总是小于2 %。该HPLC方法成功应用于片剂中标题药物的同时定量分析，并可用于片剂的分析和溶出度测试，以评估其商业样品中的扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗。

引言

扑热息痛化学上是乙酰胺，N - ( 4 -甲氧基苯基) - 4rsquo;-羟基乙酰苯胺，醋氯芬酸化学上是[·[·[ 2 - [ ( 2，6 -二氯苯基)氨基]苯基]乙酰]氧基]乙酸，氯代氧嗪化学上是2(3H )苯并噁唑酮，5 -氯- 2 -苯并噁唑酮( 1–3 )。Intas制药有限公司(印度艾哈迈达巴德马托达)将这些药片作为“HIFENAC MR”进行商业营销。片剂的成分包括:对乙酰氨基酚，500毫克；醋氯芬酸，100毫克；和氯唑沙宗，联合使用500毫克。通过使用适当的流动相，扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗峰得到充分保留和更好的分离。文献调查显示，与扑热息痛和氯唑沙宗( 4–6 )和( 10 )联合使用时，几乎没有其他成分可以使用一些分析方法。报道了片剂剂型( 8，9 )、加标人血浆( 7 )和原料药制剂( 11 )中对乙酰氨基酚和乙酰氯芬酸以及扑热息痛和氯唑沙区的估计方法。然而，文献中还没有报道过同时测定药物剂型中扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗的分析方法。在本研究工作中，建立了反相高效液相色谱法同时测定扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑氮酮的含量。虽然每片扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗的标签声明有所不同，但已经开发了一种精确的HPLC方法来评估标题药物。

C

B

A

图 1对乙酰氨基酚（A），氯唑沙宗（B）和醋氯酚酸（C）的化学结构

实验相关

材料和试剂

扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗用作工作标准，从印度浦那的Bharati Vidhypeeth获得。乙腈、正硅酸和氢氧化钠是从印度孟买沃利默克(印度)有限公司获得的。0.45米尼龙过滤器是从先进微器件有限公司(印度昌迪加尔)获得的。在整个实验中使用双蒸馏水；其他化学品为分析和HPLC级。片剂从印度市场购买，含有:扑热息痛，500毫克；醋氯芬酸，100毫克；和氯唑沙宗，500毫克。

色谱条件

Jasco HPLC用于实验工作，它包括以下组件: 3500泵、AS 3000自动进样器和PD 1000检测器。实验使用Zorbax SB C18 250 4.6mm，5m的分析柱(安捷伦，加州帕洛阿尔托)。仪器设置为:流速，1毫升/分钟；柱烘箱温度，25℃；检测器波长，270纳米；和进样量，10L。数据采集是用Borwin软件进行的。用光电二极管阵列检测器检查峰值纯度。流动相由乙腈和缓冲液(40 : 60v/v)组成，缓冲液含有50毫米正磷酸，缓冲液的pH值用10 % w/v氢氧化钠溶液调节至6。流动相中使用的缓冲液由50毫米正磷酸在双蒸馏水中组成。流动相被预混合，通过0.45微米尼龙过滤器过滤，并脱气。

标准溶液

通过将药物溶解在稀释剂中制备标准溶液，并将其稀释至所需浓度。用于标准品和样品制备的稀释剂如下:稀释剂A :乙腈；稀释剂B :乙腈和缓冲液( 40 : 60，v/v )，含有50毫米正磷酸的缓冲液，用10 % w / v氢氧化钠溶液将缓冲液的pH值调节到6。

标准溶液的制备

扑热息痛:准确称量125毫克扑热息痛，转移到50毫升容量瓶中，用10毫升稀释剂A溶解，并用稀释剂B稀释至刻度( 2500克/毫升)。

醋氯芬酸:准确称量25毫克醋氯芬酸，转移到50毫升容量瓶中，用10毫升稀释剂A溶解，并用稀释剂B ( 500克/毫升)稀释至刻度。

氯唑沙宗:准确称量125毫克氯唑沙宗，转移到50毫升容量瓶中，用10毫升稀释剂A溶解，并用稀释剂B ( 2500克/毫升)稀释至刻度。

通过将1毫升醋氯芬酸、1毫升对乙酰氨基酚和1毫升氯唑沙宗转移到50毫升容量瓶中，从列出的储备溶液中制备混合标准溶液；用稀释剂B稀释它们。该溶液含有50micro;g/mL扑热息痛、10micro;g / mL醋氯芬酸和50g / mL氯唑沙宗。从所列扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗的储备溶液中，为校准曲线制备溶液，每个校准水平的浓度范围为2.5 - 15micro;g / mL醋氯芬酸、12.5 - 75micro;g / mL扑热息痛和12.5 - 75micro;g / mL氯唑沙宗。

对照溶液的制备

称取10片，研成细粉。将相当于一片含有500毫克扑热息痛、100毫克醋氯芬酸和500毫克氯唑沙宗的量转移到100毫升容量瓶中。向该烧瓶中加入20 mL稀释剂A，连续振荡超声处理10分钟；将溶液冷却至环境温度并用稀释剂B稀释至标记。将该溶液以10000 rpm离心5分钟。从离心溶液中，将1毫升透明溶液转移到100毫升容量瓶中，并用稀释剂B稀释至刻度。

结果和讨论

色谱条件的优化

通过改变流动相中缓冲液的pH来优化色谱条件。作为整个实验中使用的流动相，含有乙腈和缓冲液( 40∶60，v/v )，缓冲液含有50毫米正磷酸，用10 % w /v氢氧化钠溶液将缓冲液的pH值调节到6。在保留时间观察到峰洗脱的顺序:对帕拉塔莫来说，2.83分钟；醋氯芬酸，4.23分钟；和氯唑沙宗，6.16分钟(图2)。通过改变流动相中使用的缓冲液的pH值来进行实验。用10 %氢氧化钠将缓冲液调节至pH 7；观察到，所有成分的保留顺序没有变化。当用10 %氢氧化钠将缓冲液调节至pH 5时，分析物的洗脱顺序会改变。保留时间如下:扑热息痛，2.85分钟；氯唑沙宗，7.72分钟；和Ace - Clofenac，8.56分钟。意味着洗脱顺序会在pH 5时影响ace -氯芬酸和氯唑沙宗；色谱图如图3所示。从这项研究中，已经观察到在流动相中使用pH 5缓冲液时，流动相的离子强度浓度会显著影响分析物的保留顺序。pH为5时，醋氯芬酸的COO -被质子化，该化合物极性较小，在反相保留时间较长。醋氯芬酸的pka值高于其他分子；在pH5时，它将与固定相一起保留，比其他分析物需要更多的洗脱时间。由于醋氯芬酸的pka值为4.157，半十六烷值为0.339，氯唑氮酮为2.190。但是当pH 7缓冲液用于流动相中时，离子强度浓度不会影响醋氯芬酸和氯唑沙宗的洗脱顺序。在pH6缓冲流动相，扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗的峰具有足够的保留力和更好的分辨率。色谱运行时间小于10分钟。在较高浓度的扑热息痛( 100 g / mL )和极低浓度的醋氯芬酸( 2g / mL )下，检查峰间的分辨率。在这种情况下，扑热息痛和醋氯芬酸之间的分辨率为7.70，醋氯芬酸和氯唑沙宗之间的分辨率为8.45。这表明峰值之间有更好的分辨率。

图 2含有氯唑沙宗，醋氯酚酸和对乙酰氨基酚的典型HPLC图谱

图 3含有PH为5的缓冲溶液的流动相的片剂的典型HPLC色谱图显示洗脱顺序的变化

（对乙酰氨基酚2.05分钟，氯唑沙宗7.72分钟，醋氯沙宗8.56分钟）

方法的验证

特异性

通过光电二极管阵列检测器对样品溶液进行峰纯度测试，检查该方法的特异性。扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗的峰纯度分别为999、996和999。峰纯度分析的结果表明分析物的峰是纯的，制剂中的赋形剂不干扰分析物的峰。

校准和线性

对扑热息痛、ace clofenac和氯唑沙宗的方法线性度在所有分析物检测浓度目标水平的25 - 150 %范围内进行测试。每种线性水平的混合标准溶液含有12.5 - 75g / mL对乙酰氨基酚、2.5 - 15g / mL醋氯芬酸和12.5 - 75g / mL氯唑沙宗。线性溶液以三倍注入。在同时测定中，发现校准图对于上述浓度中的所有分析物都是线性的；相关系数如表1所示。

精度(再现性)

通过六次测定片剂中各成分的浓度，研究了该方法的精密度。结果精度研究(表1 )表明该方法可靠且可重现，相对标准偏差小于2.0 %。

准确度(恢复测试)

通过在安慰剂中添加已知量的药物进行恢复实验，研究了该方法的准确性。该方法的回收率为三个水平，分别为每片标签声明的80 %、100 %和120 % :扑热息痛，500 mg醋氯芬酸，100毫克；和氯唑沙宗，500毫克。为每个回收级别准备了三个样品。扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗的回收率分别为100.7 - 101.4 %、100.4 - 101.0 %和100.5 - 101.3 %，如表2所示。扑热息痛、醋氯芬酸和氯唑沙宗的三个水平(九次测定)的平均回收率分别为101.0 %、100.7 %和100.8 %。